Az agglutináció a mikrobák vagy más sejtek agglutinációja és kicsapódása antitestek hatására elektrolit (izotóniás nátrium-klorid oldat) jelenlétében. A ragadós baktériumok (sejtek) csoportjait agglutinátumoknak nevezzük. A következő összetevőkre van szükség az agglutinációs reakcióhoz:

1. Antitestek (agglutininek), amelyek egy beteg vagy immunis állat szérumában vannak.

2. Antigén - élő vagy elölt mikrobák, eritrociták vagy más sejtek szuszpenziója.

3. Izotóniás (0,9%-os) nátrium-klorid oldat.

A szerodiagnózishoz használt agglutinációs reakciót tífusz és paratífusz (Vidal-reakció), brucellózis (Wright és Huddleson reakció), tularémia stb. esetén alkalmazzák. Ebben az esetben a páciens széruma az antitest, az ismert mikroba pedig az antigén. Amikor mikrobákat vagy más sejteket azonosítanak, azok szuszpenziója antigénként, egy ismert immunszérum pedig antitestként szolgál. Ezt a reakciót széles körben használják bélfertőzések, szamárköhögés stb. diagnosztizálására.

RA staging módszerek

Hozzávetőleges RA az üvegen

Telepített RA

(térfogati módszer)

Koagglutinációs reakció

Kibővített RA az üvegen (szerazonosítás)

Agglutinációs reakció üvegen. Két csepp specifikus (adszorbeált) szérumot és egy csepp izotóniás nátrium-klorid oldatot csepegtetünk egy zsírmentes tárgylemezre. A nem adszorbeált szérumokat 1:5-1:100 arányban előhígítják. Az üvegen lévő cseppeket úgy kell felhordani, hogy távolság legyen közöttük. A tenyészetet hurokkal vagy pipettával alaposan átdörzsöljük egy poháron, majd hozzáadjuk egy csepp izotóniás nátrium-klorid-oldathoz és egy csepp szérumhoz, és mindegyikben addig keverjük, amíg homogén szuszpenzió nem keletkezik. A tenyésztés nélküli szérumcsepp a szérumkontroll.

Figyelem! A szérumtenyészetet nem szabad átvinni egy csepp izotóniás nátrium-klorid oldatba, amely antigénkontroll. A reakció szobahőmérsékleten 1-3 percig megy végbe. Ha a szérumkontroll átlátszó marad, az antigénkontrollban egyenletes turbiditás figyelhető meg, és a cseppben agglutinát pelyhek jelennek meg, ahol a tenyészet szérummal keveredik tiszta folyadék hátterében, a reakció eredménye pozitívnak minősül.

Diagnosztikai fiziológiai

szérum + tenyészoldat + tenyészet

Kiterjesztett agglutinációs reakció (volumetriás módszer). A szérumhígításokat egymást követő, leggyakrabban kétszeres hígításokban készítik. A módszert tömegesnek nevezik. A vérszérum antitest-titerének meghatározásához vegyen 6 kémcsövet. Öntsön 1 ml-t a szérum kezdeti 1:50 arányú hígításából az első csőbe, és adjon 1 ml fiziológiás sóoldatot mind a 6 csőhöz beosztásos pipettával. Az első kémcsőben 1:100 hígítású szérumot kapunk 2 ml térfogattal. Az első kémcsőből vigyen át 1 ml-t a második kémcsőbe, ahol a hígítás 1:200 lesz. Tehát készítsen sorozathígításokat a szérumból az első 5 kémcsőben (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600). Öntsön 1 ml-t az ötödik csőből a fertőtlenítő oldatba. Adjon 2 csepp diagnosticumot mind a 6 csőhöz. A hatodik cső tenyésztési kontroll, mivel csak sóoldatot és diagnosztikát tartalmaz.

Hozzávalók	csőszám
						szérum kontroll	ellenőrzés diagnosztikai-kuma
Fiziológiai
A páciens széruma
tenyésztés 1:50
Diagnosticum (cseppek)
Szérum hígítás

Az ilyen ellenőrzés szükséges a spontán tenyészet-agglutináció kizárásához. A csöveket összerázzuk és termosztátba helyezzük 37°C-on 2 órára, majd egy napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd feljegyezzük az agglutinációs reakció eredményét. Gyermekek szérumával az élet első hónapjaiban agglutinációs reakció felállításakor az antitestképződés funkcionális gyengébbsége miatt alacsonyabb antitesttitereket kell azonosítani, amelyet a szérum hígításánál figyelembe kell venni. A szérum kezdeti hígítása 1:25. Az első kémcsőben 1:50-es, majd 1:100-as hígítást kapunk, és így tovább.

A reakció pozitív eredménye esetén a kémcsövekben szemcsék vagy pelyhek formájában ragadós sejtek láthatók a tiszta folyadék hátterében. Az agglutinátum fokozatosan leülepszik a fenékre, "esernyő" formájában, és az üledék feletti folyadék kitisztul. Az antigénkontroll egyenletesen zavaros.

Az üledék jellege szerint megkülönböztetünk finomszemcsés és durvaszemcsés (pehelyszerű) agglutinációt. Finom szemcsés agglutináció érhető el, ha O-szérummal dolgozunk. Durva szemcsés - mozgékony mikrobák és flagelláris H-szérumok kölcsönhatása során. Gyorsabban jön, mint a finomszemcsés, a keletkező üledék nagyon laza és könnyen törik.

A reakció intenzitását a következőképpen fejezzük ki:

Minden sejt leülepedett, a kémcsőben lévő folyadék teljesen átlátszó. A reakció eredménye élesen pozitív;

Az üledék kisebb, a folyadéknak nincs teljes megvilágosodása. A reakció eredménye pozitív;

Az üledék még kevesebb, a folyadék zavarosabb. A reakció eredménye kétséges;

a cső alján jelentéktelen üledék van, a folyadék zavaros. kétséges reakció eredménye;

Nincs üledék, a folyadék egyenletesen zavaros, mint az antigénkontrollban. Negatív reakció eredménye

Az agglutinációs reakció az antitestek (agglutininek) specifikus kölcsönhatásán alapul teljes mikrobiális vagy más sejtekkel. E kölcsönhatás eredményeként részecskék-agglomerátumok képződnek, amelyek kicsapódnak (agglutinálódnak). Az agglutinációs reakcióban baktériumok, protozoonok, gombák, élesztőgombák, rickettsia, eritrociták és más élő és elpusztult sejtek is részt vehetnek. A reakció két fázisban megy végbe: az első az antigén és az antitest specifikus kombinációja, a második a nem specifikus, azaz látható agglutinátum képződése. Az agglutinát kiválás elektrolitok, például nátrium-klorid jelenlétében történik. Az agglutinátumban lévő mikroorganizmusok életben maradnak, de elvesztik mobilitásukat.

Az agglutinációs reakciót széles körben alkalmazzák fertőző betegségek szerológiai diagnosztizálására és izolált mikrobák antigénszerkezetének meghatározására. A páciens vagy hordozó testéből izolált kórokozó antigén szerkezetének megállapítására állatok (nyúl, szamár, kos) bizonyos mikroorganizmusokkal történő immunizálásával nyert specifikus immunszérumot használnak. A mikroba azonosítása az agglutinációs reakcióban történik üvegen adszorbeált vagy monoreceptor szérummal vagy kémcsövekben specifikus agglutináló szérummal. Az adszorbeált szérumok csak az adott mikrobára specifikus antigénekre, a monoreceptor szérumok pedig csak a kórokozó egy specifikus antigénjére tartalmaznak antitesteket.

A fajszérumok antitesteket tartalmaznak egy adott mikroba összes antigénje ellen.

Egy mikroorganizmus izolált tenyészetének ehhez a fajhoz való hovatartozását a szérumampulla címkéjén feltüntetett antitest-titerhez ismert szérummal történő agglutináció határozza meg. A szérum antitestek titerét annak utolsó hígításának tekintik, amelyben még megfigyelhető az állat immunizálására használt mikrobatenyészet agglutinációja. Az adszorbeált és monoreceptor szérumokat általában hígítatlanul alkalmazzák az üvegen végzett agglutinációs reakcióban.

Az antitestek jelenlétének meghatározásakor a páciens vérszérumában azt izotóniás nátrium-klorid-oldattal hígítják, 1:50-től 1:800-ig vagy nagyobb hígításból kiindulva. Minden hígításhoz élő vagy elölt mikrobák szuszpenzióját adjuk. A hővel vagy formalinnal elpusztított mikrobákat tartalmazó készítményeket diagnosztizálják. A mikroorganizmusok tenyészeteinek melegítésével kapott diagnosztikai anyagok csak szomatikus antigéneket tartalmaznak. Ha csak formalint használunk, a flagelláris antigének a mikrobákban is megmaradnak.

A páciens vérében antitestek jelenlétében a reakcióban felvett diagnosztika összetapad, és két kémcsőben csapadék (agglutinátum) képződik. Ebben az esetben az agglutinációs reakció eredménye pozitívnak tekinthető. A kontroll csőben, ahol izotóniás nátrium-klorid oldatot és diagnosztikát adunk, a mikrobák szuszpenziójának homogénnek kell lennie (negatív agglutinációs reakció).

Az agglutinációs reakció eredményeinek számbavétele egyes betegségekben, például a leptospirózisban, csak mikroszkóposan történik a mikroszkóp sötét látóterében (mikroagglutináció). A betegség szerológiai diagnózisának felállításához a diagnosztikai betegséget figyelembe veszik. Általában 1:100 vagy 1:200 szérumhígításnak felel meg.

Az agglutinációs reakció segítségével a páciens vérszérumában antitestek kimutathatók tífusz és paratífusz (Vidal-reakció), brucellózis (Wright-reakció), tularémia stb.
Castellani reakciója. Egyes fertőző betegségek vagy olyan mikroorganizmusokkal végzett immunizálás esetén, amelyek összetételében csoportos antigéneket tartalmaznak, az erre a típusra vonatkozó specifikus antitestek mellett csoportos antitestek is megjelennek a vérszérumban. Ebben az esetben a rokon baktériumfajokat agglutinálja a keletkező szérum.

Castellani egy módszert javasolt a csoportos antitestek immunszérumokból történő adszorpciójára, amely a rokon fajokhoz tartozó mikroorganizmusok segítségével történő eltávolításán alapul, amelyek csoportantigénekkel rendelkeznek, de nem rendelkeznek specifikus antigénekkel. Az ilyen mikroorganizmusok tenyészete a szérumhoz hozzáadva adszorbeálja a nem specifikus csoportos antitesteket, és az antigén-antitest komplex centrifugálással történő eltávolítása után csak specifikus immunglobulinok maradnak a szérumban. A Castellani módszerrel kezelt szérumok az agglutinációs reakcióban rendkívül specifikusakként használhatók fel.

IMMUNOMIKROBIOLÓGIAI TANULMÁNYOK

Az immunológiai módszereket számos probléma megoldására használják:

1. Az emberi immunrendszer állapotának (immunstátuszának) felmérése az immunrendszer sejtjei és termékeik mennyiségi és funkcionális jellemzőinek meghatározása céljából.

2. Az emberi szövetek összetételének és jellemzőinek meghatározása: vércsoportok, Rh-faktor, transzplantációs antigének.

3. Fertőző betegségek és az ezekkel szembeni rezisztencia diagnosztizálása ellenanyagtiterek kimutatásával és megállapításával (szerodiagnózis), a szervezetben lévő kórokozók antigénjeinek azonosításával, ezen antigénekkel szembeni sejtreakciók meghatározásával.

4. Emberi és állati szervezetekből izolált baktérium- és víruskultúrák szerodentizálása.

5. Antigén vagy haptikus tulajdonságokkal rendelkező anyagok (hormonok, enzimek, mérgek, gyógyszerek, gyógyszerek stb.) kimutatása az emberi szervezetben és a környezetben.

6. Immunpatológiai állapotok, allergiák, transzplantációs és daganatellenes reakciók azonosítása.

Az antigén és az antitest közötti kölcsönhatás szerológiai reakciókban két fázisban zajlik:

1) konkrét- az interakciós fázis, amelyben az antitestek (paratópok) és az antigén epitópok aktív központjainak komplementer kapcsolódása következik be. Ez a fázis általában néhány másodpercig vagy percig tart;

2) nem specifikus- a megnyilvánulási szakasz, amelyet az immunkomplexek képződésének külső jelei jellemeznek. Ez a fázis néhány perctől több óráig terjedhet.

Az antitestek és az antigén közötti optimális specifikus kölcsönhatás egy semlegeshez közeli pH-jú izotóniás oldatban történik. Az antigén-antitest reakciót az in vitro rendszerben többféle jelenség kísérheti.

agglutináció,

csapadék,

lízis.

A reakció külső megnyilvánulásai az antigén fizikai-kémiai tulajdonságaitól (részecskeméret, fizikai állapot), az antitestek osztályától és típusától (teljes és nem teljes), valamint a kísérleti körülményektől (közepes konzisztencia, sókoncentráció, pH, hőmérséklet) függnek. ).

Az antigének és antitestek többértékűsége biztosítja a szabad szemmel látható aggregátumok megjelenését. Ez a hálózatképződés elméletének megfelelően történik, amely szerint a keletkező antigén-antitest komplexhez szekvenciálisan kapcsolódnak más antitest- és antigénmolekulák. Ennek eredményeként hálózati struktúrák jönnek létre, amelyek aggregátumokká alakulnak, amelyek kicsapódnak. A reakció jellege és súlyossága az antigének és antitestek mennyiségi arányától függ. A reakciók akkor a legintenzívebbek, ha a reagensek egyenértékű arányban vannak jelen.

A rács (hálózatok) kialakulásának szükséges feltétele, hogy minden antigénmolekulánál háromnál több antigéndetermináns, és minden antitestmolekulánál két aktív centrum legyen jelen. Az antigénmolekulák rácscsomópontok, az antitestmolekulák pedig összekötő láncszemek. Az antigén- és antitestkoncentrációk optimális arányának (ekvivalencia zóna) területe, amikor a csapadék képződése után sem szabad antigének, sem szabad antitestek nem mutathatók ki a felülúszóban.

Kicsapásra képes aggregátumok képződnek, amikor az antigéneket komplett antitestekkel kombinálják. A hiányos antitestek (monovalensek) nem okoznak hálózati struktúrák és nagy aggregátumok kialakulását. Az ilyen antitestek kimutatására antiglobulinokon alapuló speciális módszereket alkalmaznak (Coombs-reakció).

A szerológiai reakciókat nagy specifitásuk és érzékenységük miatt antigének és antitestek kimutatására és mennyiségi meghatározására használják. A reakciókban lévő immunreagensek számát titerrel fejezzük ki – a szérum vagy antigén maximális hígításával, amelynél a reakció még megfigyelhető.

A mikrobiológiai és immunológiai laboratóriumokban végzett szerológiai reakciókat két célra használják:

1) mikroorganizmusok, toxinok, antigén általában ismert antitest (immundiagnosztikai szérum) felhasználásával történő szerazonosítására,

2) szerodiagnózishoz - a páciens vérszérumában lévő antitest természetének meghatározása bakteriális, vírusos, ritkábban egyéb fertőző betegségekben ismert antigén (diagnosticum) segítségével.

Ismert immundiagnosztikai szérumra van szükség az antigén generikus, fajának és típusának meghatározásához. Állatoknak (gyakran nyulaknak) elölt vagy élő mikroorganizmusok, bomlástermékeik, semlegesített vagy natív toxinok növekvő dózisában történő ismételt beadásával nyerik őket. Az állatok immunizálásának bizonyos ciklusa után az állatok tömeges vérontását vagy teljes kivéreztetését végezzük. A steril edényben összegyűjtött vért először 37°C-os termosztátba helyezzük 4-6 órára a véralvadás felgyorsítására, majd egy napra gleccserbe. A kapott átlátszó szérumot steril edénybe szívjuk, tartósítószert adunk hozzá, meghatározzuk az antitest-titert, sterilitást vizsgálunk és ampullákba öntjük.

Használt nem adszorbeáltés adszorbeált diagnosztikai szérumok. A nem adszorbeált szérumok magas antitesttiterrel rendelkeznek, de csoportos (kereszt) reakciókat képesek előidézni.

Az adszorbeált szérumokat a hatás szigorú specifitása jellemzi (csak homológ antigénnel reagálnak). Csak egy specifikus antigén ellen antitesteket tartalmazó szérumot nevezünk monoreceptor.

Fluorokrómokkal, enzimekkel, radioizotópokkal jelölt szérumokat is gyártanak, amelyek lehetővé teszik az antigén nyomainak nagy pontosságú kimutatását is.

A szerológiai reakciókban antigénként (diagnosztikaként) élő vagy elpusztult baktériumok szuszpenzióit, azok hasítási termékeit, toxinjait és vírusait használják fel. Egyes esetekben mikroorganizmusokból és állati szövetekből származó kivonatokat vagy kémiailag izolált antigéneket használnak.

Minden immunmikrobiológiai módszer 3 csoportba osztható:

1) alapján az antigén és az antitest közvetlen kölcsönhatása(agglutináció, precipitáció, hemagglutináció, immobilizáció stb. jelenségei);

2) alapján közvetített antigén-antitest kölcsönhatás(közvetett hemagglutináció, koagglutináció, latex agglutináció, szénagglomeráció, bentonit agglutináció, komplementkötés stb. reakciói);

3) használata jelölt antitestek vagy antigének(fluoreszcens antitestek módszere, enzim immunoassay és radioimmunoassay és egyéb módszerek).

AZ AGGLUTINÁCIÓS REAKCIÓK

Ezekben a reakciókban részecskék (mikrobiális sejtek, eritrociták és egyéb corpuscularis antigének) formájú antigének vesznek részt, amelyek az antitestekkel összetapadnak és kicsapódnak.

Agglutinációs reakció felállításához(RA) három összetevőt igényel: 1) antigén (agglutinogén);

2) antitest (agglutinin)

3) elektrolit (izotóniás nátrium-klorid oldat).

Hozzávetőleges agglutinációs reakció (RA)

A hozzávetőleges vagy lamellás RA-t szobahőmérsékleten egy tárgylemezre helyezzük. Ehhez Pasteur pipettával külön-külön csepegtetünk az üvegre egy csepp 1:10-1:20 hígítású szérumot és egy kontrollcsepp izotóniás nátrium-klorid oldatot. A telepeket vagy a napi baktériumtenyészetet (egy csepp diagnosztizálást) mindkét bakteriológiai hurokba bevisszük, és alaposan összekeverjük. A reakciókat néhány perc alatt vizuálisan is figyelembe veszik, esetenként nagyítóval (x5). Pozitív RA esetén egy csepp szérummal nagy és kis pelyhek megjelenése figyelhető meg, negatív RA esetén a szérum egyenletesen zavaros marad.

Kiterjesztett agglutinációs reakció a specifikus antitestek titerének azonosítása érdekében a betegben.

A szerodiagnózishoz szükséges kiterjesztett RA-t a betegek szérumába helyezik. Izotóniás nátrium-klorid-oldattal is hígítják 1:50-1:100-tól 1:800-ig vagy 1:1600-ig.Mivel az alacsonyabb szérumtiterek normál agglutinineket tartalmazhatnak, amelyek egészséges emberekben vagy más diagnózisú betegekben (diagnosztikai titer) vannak ). Ebben a reakcióban antigénként diagnosztikai anyagokat használnak - általában az elölt baktériumok ismert szuszpenzióit.

Előzetesen 1 ml izotóniás nátrium-klorid oldatot öntünk agglutinációs csövekbe. Az elsőhöz 1 ml 1:100 arányban hígított szérumot adunk, majd összekeverés után 1 ml-t a másodikba, a másodikból a harmadikba stb. Az így kapott kétszeres szérumhígításokhoz (1:100-1:1600 vagy nagyobb) 1-2 csepp baktériumszuszpenziót adunk, amely 1 ml-enként 3 milliárd mikrobatestet tartalmaz. A csöveket összerázzuk, és 2 órára 37°C-os termosztátba helyezzük, majd egy napig szobahőmérsékleten tartjuk.

Az expandált agglutináció reakciójának számbavétele az egyes kémcsövek egymás utáni kiértékelésével történik, a kontrollokkal kezdve, enyhe rázással. A kontrollcsövekben nem lehet agglutináció. Az agglutinációs reakció intenzitását a következő jelek jelölik: ++++ - teljes agglutináció (az agglutinát pelyhek abszolút átlátszó folyadékban); +++ - hiányos agglutináció (pelyhek enyhén opálos folyadékban); ++ - részleges agglutináció (a pelyhek jól láthatóak, a folyadék enyhén zavaros); + - gyenge, kétes agglutináció - a folyadék nagyon zavaros, a benne lévő pelyhek rosszul megkülönböztethetők; - - agglutináció hiánya (a folyadék egyenletesen zavaros).

A szérumtiter utolsó hígítása, amelyben az agglutináció intenzitása legalább két plusz (++) értékre becsülhető.

a mikrobiológiában

"Agglutinációs reakció és típusai (RA)"

Terv:

1. Bevezetés……………………………………………………………………………………..3

2. RA üvegen……………………………………………………………………………………….4

3. PA kémcső………………………………………………………………………………….5

4. Felhasznált irodalom……………………………………………………………………..7

1. Bemutatkozás.

A mikrobiális antigén és az antitestek kölcsönhatása szigorúan specifikus, és az állati szervezetben irányul a kórokozó és toxinjainak semlegesítésére. Az antigén és az antitestek in vitro kölcsönhatását bizonyos körülmények között látható jelenségek (agglutináció, precipitáció, immunlízis) kísérik, ami lehetővé teszi a szerológiai (a latin szérum-szérum szóból) nevezett AG-AT reakciók gyakorlati alkalmazását. A biogyárak ismert specifikus irányú (diagnosztikai) antigéneket és immunszérumokat (antitesteket) állítanak elő. Az ilyen szérumok segítségével a szerológiai reakciókban lehetőség nyílik egy ismeretlen mikroorganizmus azonosítására, vagy egy ismert antigén felhasználásával a szervezetben a kórokozó bejuttatására válaszul szintetizált antitestek kimutatására, és ezáltal a diagnózis felállítására (szerológiai diagnózis) . Ezenkívül szerológiai reakciók segítségével értékelhető az immunválasz intenzitása oltás vagy fertőző betegség után.

Az agglutinációs reakciók, mint például a közvetett agglutináció és a Coombs, a korpuszkuláris antigének és az antitestek in vitro kölcsönhatásán és a keletkező komplexek kicsapódási képességén alapulnak. Korpuszkuláris antigénként a mikroorganizmusokból kivont baktériumsejteket vagy oldható antigéneket alkalmazzák, amelyek a hordozók testein adszorbeálódnak: eritrociták, latex részecskék stb.

A korpuszkuláris antigének antigéndeterminánsai specifikusan kölcsönhatásba lépnek a homológ antitestekkel (a reakció specifikus, láthatatlan fázisa), majd az antigén-antitest komplexek nagy, szabad szemmel látható konglomerátumokat képeznek, amelyek kicsapódnak - agglutinálódnak (a reakció nem specifikus, látható fázisa) . A mikrobák nem lobogó formáiban (Brucella) szemcsés agglutánsok képződnek, a flagellákban (Escherichia, Salmonella) - nagy pamut, amelyek fordított esernyő formájában telepednek le a kémcső aljára, és rázáskor könnyen eltörnek. . Az antigének és antitestek csak elektrolit jelenlétében lépnek kölcsönhatásba (0,8%-os nátrium-klorid oldatban). A reakció lefolyását befolyásolja az elektrolit sókoncentrációja, a szuszpenzióban lévő mikrobasejtek száma, a szérumkoncentráció, a pH, a hőmérséklet és egyéb tényezők.

Agglutinációs reakció (ra).

Megkülönböztetni a specifikus agglutinációt, a raj az antigén kölcsönhatásán alapul Val vel homológ antitest , az állat testében található, Krom ezt az antigént vitte be (immunagglutináció); nem specifikus (kémiai), a környezet pH-jának, az elektrolitok koncentrációjának változásából adódóan; spontán, to-ruyu figyelhető meg, amikor a baktériumokat (amelyek R-formájúak) sóoldatban szuszpendálják és melegítik, ami a baktériumsejt kolloid állapotának megváltozásával jár. Antigén , Az RA-ban részt vevő antitestet agglutininnek, a keletkező csapadékot agglutinátnak nevezik. Az agglutinátum képződésében az antigén és az antitestek mennyiségi aránya (optimális jelenség) számít. Az antitestek feleslegével vagy hiányával az A.

Az agglutinációs reakció (RA) az egyik első olyan immunológiai reakció, amelyet a mikrobiológiai gyakorlatban alkalmaznak. F. Vidal először (1895) használta az RA-t a tífusz diagnosztizálására. Később (1897) A. Wright ugyanezt a reakciót alkalmazta az emberek brucellózisának diagnosztizálására. Az RA alkalmazást talált csirkék pullorózisának, leptospirózisának, kancák fertőző vetélésének diagnosztizálásában, valamint ismeretlen mikrobakultúrák ismert agglutináló szérum alapján történő tipizálásában is. Az RA nagyon érzékeny; 0,01 µg antitest fehérje nitrogént képes kimutatni 1 ml-ben.

Az agglutinációs reakciónak számos változatát fejlesztették ki, amelyek módszertani megvalósításában és a vizsgálat céljában különböznek egymástól.

2. Ra üvegen.

Az RA ezen változatában a szérum és az antigén is tesztelhető, de leggyakrabban ezt a változatot használják mikroorganizmusok azonosítására.

1. A mikroorganizmus azonosításához (m / o) egy csepp ismert agglutináló szérumot, például szalmoneliózist, és egy csepp sóoldatot (kontroll) külön-külön csepegtetünk egy zsírtalanított üveglemezre. Ezután a vizsgált tenyészet baktériummasszáját bakteriológiai hurokkal a telepről Petri-csészében vagy a ferde MPA felszínéről kémcsőben vesszük ki, és külön szuszpendáljuk immunszérumban és sóoldatban, amíg homogén szuszpenziót nem kapunk. Az eredményt 2 ... 4 perc elteltével veszik figyelembe.

Az eredmények elszámolása: a kontrollmintában ne legyen változás. A bakteriális tenyészet és az immunszérum specifikus megfelelése esetén agglutinát pelyhek jelennek meg (pozitív eredmény), az agglutinációs jelenség hiányában arra a következtetésre jutunk, hogy a vizsgált baktériumtenyészet nem felel meg az immunszérumnak.

2. Az antitestek kimutatását a vizsgált vérszérumban a brucellózis szerodiagnózisában használt rose-bengal teszt példája alapján vizsgáljuk meg. 0,3 ml vizsgált állati vérszérumot és 0,03 ml brucella antigént (rózsaszín bengáli színnel festett brucellasejtek) egy tárgylemezre viszünk. A komponenseket az üveg rázatásával alaposan összekeverjük, és az eredményt 4 perc elteltével figyelembe veszik.

Számviteli eredmények: pozitív reakció esetén rózsaszín agglutinát pelyhek jelennek meg. Az ilyen típusú szerológiai reakciót kvalitatívnak nevezik, mivel segítségével kimutathatóak a kórokozó elleni antitestek az állat vérszérumában, mennyiségi tartalmuk azonban lehetetlen.

Agglutinációs reakció Agglutinációs reakció

(RA) – az Ag és Ab kimutatására és mennyiségi meghatározására szolgáló módszer, amely azon a képességen alapul, hogy szabad szemmel látható agglomerátumokat képeznek. A fertőzések klinikáján. betegségekre vagy egyéb célokra ismeretlen mikrobák és sejtek azonosítására, vérben és egyéb folyadékokban lévő antitestek jelenlétének és mennyiségének meghatározására szolgál. A meghatározás elve az Ag és Am közötti kölcsönhatás specifikusságán alapul, és abból áll, hogy az ismertet az ismeretlentől megtaláljuk. Az RA-nak számos változata létezik: kvantitatív és kvalitatív, in vitro és üvegen, volumetrikus és csepegtető, hagyományos, gyorsított és expressz módszerek. Az RA beállításához a következőkre van szüksége: 1) s-ka vér. A baktérium típusának (var) meghatározásával rendelkező változatban ipari agglutináló s-ki-t használnak, amelyet nyulak immunizálásával állítanak elő. Az Ab típusának meghatározásával ellátott változatban a kutatásból nyert vérmintát vesznek. emberek vagy állatok. Az S-ka legyen steril, és nem tartalmazhat lebegő részecskéket. A fő hígítást sóoldatban készítjük el. 2-4-szer alacsonyabbnak kell lennie, mint a betegség diagnosztikai titere; 2) Ag . A reakció változatában az Ab típusának meghatározásával termelési diagnosztikát alkalmaznak; Az Ag meghatározásával ellátott változatban a diagnosztikai anyagokat maguk készítik 18-20 órás agar (ritkábban húsleves) sóoldatban készült szuszpenzió formájában. mikroba inaktivált vízfürdőben 70 °C-on 1 órán át vagy 24 órás inkubációval 37 °C-on formalinnal (0,2% végső koncentráció); 3) sóoldat elektrolit. Beállítási technika ömlesztett soros cső RA az Ab titer meghatározására s-ke-ben: az s-ki főhígításából több sor munkahígítást készítünk. A sorok száma a kísérletben felvett diagnosztikák számától függ, a számot és a hígítási faktorokat a gyanús betegség diagnosztikai titere határozza meg. A sornak legalább a diagnosztikai Ab-titernek megfelelő hígítást kell tartalmaznia, két hígítást alatta és két hígítást felette. például ha a diagnosztikai titer 1:100, akkor az RA volumetrikus beállítási módszerével az s-ki következő hígításait kell elkészíteni: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1 "400; csepegtető módszerrel az első hígítás (1:25) nem szükséges, de egy másik magasabb hígítás szükséges - 1: 800. Tudományos kutatás során az s-ku-t negatív reakcióig titrálják. 25 ml sóoldat ha a reakciót 0,5 ml-es és 0,5 ml-es térfogatban 1 ml-es térfogatban állítjuk be. Az 1. és 2. kémcsőbe öntsünk 0,25 (0,5) ml -ki-vel készült főhígítást, a 2. kémcső, amelyben az s-ki térfogata és hígítása kétszeresére nőtt, 0,25 (0,5) ml-t a 3.-ba, a 3-ból a 4-be, stb. mindenbe öntjük, hogy egyensúlyba kerüljenek a térfogatok.ugyanúgy a tenyésztési sorozata is. s-ki hígítása s-ki térfogatának megfelelő térfogatban adjunk hozzá diagnosztizáló anyagot, aminek eredményeként a hígítás minden kémcsőben 2-szeresére nő. A kísérlet megfelel az s-ki kontrolljának (0,25 -0,5 ml az s-ki főhígításának és ugyanennyi sóoldatnak) és az AG kontrolljának (0,25 - 0,5 ml diagnosticum és ugyanennyi sóoldat). Ha több diagnosztikát veszünk a kísérletbe, akkor mindegyiknek megvan a saját kontroll Ag. A kémcsövekkel ellátott állványt jól felrázzuk, és 4 órára 37°C-os termosztátba helyezzük, majd másnapig szobahőmérsékleten hagyjuk, ezt követően az üledék mennyisége és a kitisztultsági foka alapján számítjuk ki az RA-t. folyékony. Ezen mutatók meghatározása az agglutinátumok természetétől függően szabad szemmel, sötét háttéren, agglutinoszkóppal vagy mikroszkóp tükör homorú felületén történik. Az elszámolás az ellenőrzésekkel kezdődik: az ellenőrzésnek átlátszónak kell lennie, Ag - egyenletesen zavaros (a cső rázása után). Ha a kontrollok jók, minden kísérleti kémcsőben megállapítják az agglutináció jelenlétét és mértékét, amelyeket pluszokkal jeleznek: nagy üledék és a folyadék teljes kitisztulása - 4 plusz; nagy üledék és a folyadék hiányos megvilágosodása -3 plusz; észrevehető üledék és a folyadék észrevehető megvilágosodása - 2 plusz. Ezt követően meghatározzuk a titert: a legmagasabb hígítást, legalább 2 plusz agglutinációs intenzitással. Vizsgatiter Az s-ki-t ennek a betegségnek a diagnosztikai titerével hasonlítják össze. Ha a vizsgálat titere s-ki 2-szer alacsonyabb, mint a diagnosztikai, a reakciót kétesnek értékeljük; ha a titer egyenlő a diagnosztikai értékkel - gyengén pozitív; ha 2-4-szer magasabb annál - pozitívnak, ha 8-szor nagyobb - élesen pozitívnak. Az egészséges emberekben az Ab széles eloszlása ​​esetén az Ab titerének növelését használják az RA értékelésére. Az Ag típusának meghatározásához a soros RA-ban a sorok számának meg kell egyeznie az azonosításhoz használt diagnosztikai s-ok számával. A diagnosztikus s-ki főhígításából az At titerének meghatározására az RA-ban leírtakhoz hasonlóan egymás utáni kétszeres hígítások sorozatát készítjük. A hígítási faktorok az agglutináló s titerétől függenek A kísérletben az 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 sz. hígítások titerével megegyező hígítás jelenléte Ag azonos mennyiségű kutatás az s-ki hígításaihoz hozzáadva az s-to hígítása 2-szeresére növekszik.több s-to is érintett, akkor mindegyiknek saját vezérlésre van szüksége.A reakció lezajlása után az állvány erőteljesen felrázzuk és 37 °C-os termosztátba helyezzük. Az eredményeket a fent leírtak szerint kell figyelembe venni. A kísérletben vett s-ke Ag, a reakció titerének meg kell felelnie a standard diagnosztikus s-ki titerének legalább a felének. Az 1 4 és az alatti titereket csoportreakciónak tekintjük. csepegtet m d Az RA beállítás abban különbözik a volumetrikustól, hogy az s-ku-t 1 ml térfogatban hígítják, az Ag-t magasabb koncentrációban (10 milliárd / ml) használják, és hozzáadják 1 - 2 cseppek a kémcsőben Az s-ki hígítása Ag hozzáadása után változatlannak tekintendő.Egyébként a beállítás, a rögzítés és a kiértékelés módja hasonló a térfogati módszerhez

(Forrás: Mikrobiológiai szakkifejezések szójegyzéke)