Техника определения группы крови стандартными сыворотками. Техника определения группы крови по стандартным сывороткам

ИНСТРУКЦИЯ

О технике выполнения манипуляции

«Определение группы крови с помощью

сывороток (по системе АВО) »

по специальностям

2-79 01 01 «Лечебное дело»,

2-79 01 31 «Сестринское дело»

Определение группы крови с помощью

стандартных изогемагглютинирующих

сывороток (по системе АВО)

Показания: необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательству.

Материальное обеспечение:

1) две серии стандартных гемагглютинирующих сывороток в специальных штативах;

2) флакон с изотоническим раствором натрия хлорида;

3) маркированные планшеты;

5) пипетка для взятия крови;

6) пипетки для изотонического раствора;

7) песочные часы на 5 мин;

8) перчатки;

9) регламентированный дезинфектант.
Определение группы крови проводится в помещении с хорошим освещением и температурой от +15 до + 20 °С. Манипуляцию выполняют в перчатках. При наличии повреждений на коже медсестра временно отстраняется от работы. В случае попадания крови на кожу или слизистые проводят обработку по действующей инструкции.

Последовательность выполнения:

1. Проверить качество стандартных гемагглютинирующих сывороток:

1) по цветовой маркировке;

2) внешнему виду (светлая, прозрачная);

3) сохранности ампулы;

4) наличию правильно оформленной этикетки с указанием группы крови, титра, срока годности, места приготовления;

2. Разместить на столе:

1) два комплекта стандартных гемагглютинирующих сывороток трех групп (О, А, В) двух серий и одну ампулу с сывороткой АВ (IV), каждая ампула должна иметь пипетку;

2) флакон с изотоническим раствором, пипетку;

3) стерильный маркированный планшет;

4) предметные стекла (стеклянные палочки);

5) пипетку для взятия крови;

6) песочные часы;

3. Написать на планшете Ф.И.О. больного, группу крови;

4. Надеть перчатки;

5. Нанести на планшет по 1 капле (0,1 мл) стандартных гемагглютинирующих сывороток трех групп двух серий в соответствующие гнезда планшета;

6. Нанести 1 каплю крови из пальца или из пробирки пипеткой в соответствующую ячейку;

7. Поместить в каждое гнездо планшета, рядом с сывороткой, по 1 маленькой капле (0,1 мл) исследуемой крови в соотношении кровь: реагент -1:10 (кровь забирать из большой капли, используя для этого разные стеклянные палочки);

8. Смешать кровь с реагентом, после смешивания планшет осторожно покачать в руках. Добавить по 1 капле 0,9% раствора натрия хлорида к каплям сыворотки с эритроцитами, где наступила агглютинация, но не ранее чем через 3 мин;

9. Оценить результат через 5 мин после начала реакции:

1) реакция агглютинации может быть положительной и отрицательной;

2) если сыворотки дали положительную реакцию, значит, кровь содержит оба агглютиногена АВ, в этом случае следует провести дополнительное контрольное исследование со стандартной сывороткой группы АВ (IV);

10. Произвести дезинфекцию отработанного материала.

Как происходит определение группы крови по стандартным сывороткам? Наверное, наблюдая за действиями лаборанта и за происходящей на специальной планшетке химической реакцией, подобный вопрос задавали себе многие. Ничего загадочного в этом процессе нет, а механизм установления групповой принадлежности основан на реакции агглютинации, которая происходит при взаимодействии компонентов крови агглютиногенов и элементов сыворотки.

Основные характеристики групп

Определение группы по стандартным сывороткам основано на том, что в крови человека содержатся, в различных комбинациях агглютиногены (А и В) и агглютинины (a и b). При встрече одноименных агглютинина и агглютиногена происходит быстрая агглютинация, а на планшетке этот процесс будет выглядеть как распадание однородного кровяного пятна на множество мелких пятнышек.

Для определения группы крови используются сыворотки, содержащие агглютинины различных групп, которые вступают в реакцию с содержащимися на поверхности эритроцитов агглютиногенами:

0 (I) - содержит только агглютинины a и b;
A (II) - имеется антиген А и агглютинин b;
В (III) - есть агглютиноген B и антитело а;
АВ (IV) - в сыворотке нет антител, а на поверхности эритроцита располагается агглютеногенный комплекс АВ.

Тип крови с помощью стандартных сывороточных растворов определяется в течение 5-10 минут и не требует дополнительной подготовки пациента к исследованию. Этим способом можно исследовать как венозную, так и периферическую кровь, получая одинаковый результат.

В экстренных случаях (подготовка к срочной операции или необходимость немедленного восполнения кровопотери) проводят смешивание, капая кровь из прокола на пальце больного прямо на планшетку с налитыми на нее стандартными сыворотками.

Техника проведения анализа

Для исследования применяется плоская планшетка с углублениями в ней. Углубления расположены по 3 в ряд (имеется 2 ряда) и имеется одно внизу.

Над каждой парой углублений для удобства лаборанта написано I, II или III и для нанесения в ячейки соответствующих стандартных сывороток.

Анализ проводится так:

В первом ряду в соответствующие ячейки наливается несколько капель сывороточного раствора I, II и III вида (в соответствии с наименованием углубления).
Во второй ряд дублируются аналогичные растворы, но другой серии изготовления (необходимый контроль для избегания ложной агглютинации из-за некачественной сыворотки).
В растворы стеклянной палочкой добавляются по капле венозной или периферической крови.
Перемешивание, чтобы избежать случайного повреждения эритроцитов, производится плавным покачиванием планшетки.
Далее материал оставляется на 5 минут, после чего проводится оценка полученного результата.

Оценивается вид и структура жидкостей по типу раствора, также проверяется соответствие с аналогичным раствором в рядом расположенной ячейке.

Если, к примеру, в одном углублении с цифрой II произошла агглютинация, а в другом с аналогичным реактивом нет, то определение группы крови с помощью сывороточных составов считается неверным. Его необходимо повторить, используя сыворотки 2 других серий.

Оценка результатов

Тип крови стандартными сывороточными реактивами определяется на основании видимой реакции агглютинации, и результат может быть следующим:

I - основные и контрольные капли на лабораторной тарелочке остались без изменений.
II - химическая реакция произошла в ячейках I и III.
III - наблюдается агглютинация в углублении I и II.
IV - имеются изменения во всех емкостях лабораторной тарелочки.

При определении IV типа всегда проводится контроль с сывороткой IV, чтобы предотвратить ложноположительный результат. В контрольном смешивании по истечении 5 минут не должно произойти никаких изменений.

Методом определения типа крови при помощи стандартных сывороточных реактивов пользуются почти во всех лабораториях. Быстрый и доступный способ позволяет в течение нескольких минут определит группу.

Полученные данные учитываются только в том случае, когда агглютинация ярко выражена. Слабая химическая реакция может быть из-за старых реактивов или из-за неправильного проведения анализа. Результат не может считаться достоверным. В сомнительных случаях, помимо исследования стандартными сывороточными составами, могут быть сделаны для уточнения группы тесты с цоликлонами или «эритротест».

С помощью стандартных сывороточных составов определение группы возможно за несколько минут. Метод очень прост и не требует от лаборанта специальных навыков.

В этой статье речь пойдёт о методах определения группы крови по системе АВ0, а также об экспресс-методе определения резус-фактора.

Сначала поговорим о целях определения группы крови, а также об истории изучения этого вопроса. Интерес к переливанию крови зародился давно. Ещё в Древнем Египте врачи пытались перелить её раненым, больным, умирающим. В основном использовали в качестве доноров молодых животных. Считалось, что они обладают особой природной силой и к тому же не подвержены порокам, как люди. Переливание от человека человеку было чаще всего безуспешным. Причины этого гораздо позже открыл австрийский врач Карл Ландштейнер. Он определил, что у человека находятся различные антигены и антитела, образующие особую иммунную систему.

В настоящее время выделено около пятисот различных антигенов, но на практике группы крови определяют по системе АВ0.

По этой системе в состав крови входят :

агглютиногены А и В (антигены). Локализация – эритроциты;
агглютинины альфа и бета (антитела). Локализация – сыворотка.

Расположение их в крови :

Антиген А вместе с антителами альфа;
Антиген В вместе с антителами бета;
Только антитела альфа и бета.

Одновременно одноимённые антигены и антитела находиться не смогут, так как их встреча приводит к бурному проявлению т.н. реакции изогемагглютинации, что приведёт к гемолизу (разрушению) эритроцитов и прочим патологическим реакциям.

Техника определения группы крови состоит в применении знания этой особенности.

1-я группа: отсутствуют агглютиногены, в сыворотке – агглютинины есть;
2-я группа: есть А и бета;
3-я группа: есть В и альфа;
4-я группа: есть А, В, агглютининов нет.

Техника определения

Техника определения группы крови по системе АВ0 основана на визуальном наблюдении агглютинации .

Проводить исследование нужно при:

Задайте свой вопрос врачу клинической лабораторной диагностики

Анна Поняева. Закончила нижегородскую медицинскую академию (2007-2014) и Ординатуру по клинико-лабораторной диагностике (2014-2016).

Во многих случаях скорую медицинскую помощь пострадавшему человеку возможно оказать только при знании принадлежности его крови по классификации АВ0. Ведь бывают ситуации, когда кровотечение невозможно остановить оперативно, и переливание – это необходимая манипуляция для реанимации пациента. В экстренных случаях невозможно узнать группу и резус.

Знание своих характеристик может ускорить оказание медицинской помощи

Так же важно проводить подобные исследования при планировании и во время вынашивания ребенка для определения трансфузионной совместимости и для выявления риска проявления гемолитической болезни у новорожденного, причиной которой становится несовместимость крови матери и плода по системе AB0. Возможные различия могут привести к иммунным конфликтам в организме матери. Поэтому стоит как можно раньше узнать о наличии или отсутствии теоретически возможного заболевания.

Для этого существуют моментальные тесты, позволяющие определить тип крови.

Определение типа крови при беременности – один из важных этапов диагностики

Методы определения

В условиях современной медицины известно несколько методов, по которым возможно определить принадлежность крови к одной из групп:

диагностика с использованием цоликлона, который выступает в качестве индикатора;
методика перекрестной реакции;
эритротест;
метод стандартных сывороток.

Чаще находит место в исследованиях именно последний из перечисленных способов: использование сыворотки для определения группы крови.

Исследование крови с использованием методики стандартных сывороток

Суть метода на основе сыворотки

Сывороточный метод хорош в тех случаях, когда из-за дополнительных сложностей с определением группы крови (например, иммуно-дефицитный, возрастной фактор) требуется довольно широкий спектр тестов. Сыворотка же способна свести множество измерений к одному.

Под группой в гематологии подразумевается набор антигенов, которые, располагаясь на эритроцитах, определяют их особенности.

Антигены представляют собой огромный ряд веществ с разными свойствами и качественными характеристиками, но классифицируют по двум системам:

Система AB0. Представляет собой два эритроцитных антигена, объединённых в группы – агглютиногены A и B, плюс два соответствующим им антитела – a (анти-А) и b (анти-B). Их совокупность или же сочетание друг с другом и образует разнообразие известных сегодня групп крови (всего их 4). Отдельно выделяется ряд разновидностей сильных или слабых вариантов одних и тех же антигенов. Например, антиген A1, имеющий концентрацию более 80% или A2, составляющий 20% и так далее. Знание такой теоретической специфики предназначено для предотвращения ошибки в результатах исследования, которая может привести к летальному исходу, так как схема реанимационного лечения будет полностью нарушена, и возможность найти нового донора с соответствующей группой крови не всегда есть.

Строго необходимо переливать кровь, эритроциты и плазму того типа, который отмечен у реципиента, чтобы при переливании не произошла реакция отторжения. В ситуациях особенной экстренности возможно переливание эритроцитов группы 0, у которых отсутствуют групповые агллютиногены.

Таблица по системе АВ0

Система резус-фактора. Резус-фактор – это еще один антиген, который обозначается латинской буквой D. Он либо присутствует на эритроцитах (любой группы по АВ0), либо нет. В последнем случае человек считается резус-отрицательным. Есть и другие резус-антигены, но они гораздо менее иммуногенны, не вызывают реакции отторжения и поэтому не учитываются.

Определение резус- фактора

Стандартные сыворотки для определения группы крови – это специальные растворы, полученные путем извлечения из донорской крови плазмы с входящими в неё антителами и разведенные добавлением в этот состав изотонического раствора хлорида натрия.

Методика определения показателей

Алгоритм, который обуславливает определение группы крови и резус-фактора стандартными сыворотками, сводится к ряду манипуляций.

Изготовление сыворотки

Самый логичный и общепринятый шаг в процедуре изготовления сыворотки – это отмывание заранее полученной от донора крови для предотвращения попадания в организм реципиента инородных веществ, которые в дальнейшем могут вызвать реакцию, которая послужит причиной для неверного трактования результатов. Далее, путем центрифугирования, плазма крови в очищенном состоянии готова к использованию в изготовлении сыворотки.

Из полученного ранее раствора пипеткой отделяют 1 мл плазмы, после чего он добавляется во вторую емкость, наполненную изотоническим раствором. Необходимо соблюдать строгое соотношение плазмы, равное 1:256. В противном же случае состав крови при последующих исследованиях может быть определён неверно.

Логично отметить, что сыворотки, предназначенные для определения группы крови, разные по составу. Всего для единичного исследования используют три стандартные сыворотки двух серий для каждой группы, различные по цвету:

I(0) – не имеет окраски,
II(А) – голубая и III(B) – розоватая.

На одно исследование приходится две сыворотки одного типа: одна считается контрольной, другая же, собственно, служит для самого исследования.

Проведение исследования

Определение группы крови сыворотками проводится строго при температуре 15-25 градусов по Цельсию. Помещение, в котором проводится данное клиническое исследование, должно быть хорошо освещено и быть предназначено именно для таких тестов. Для его проведения потребуется приготовить следующие приспособления и инструменты для измерений:

продезинфицированную заранее посуду белого цвета;
гигроскопическую вату,
карандаш, которым нужно в дальнейшем поделить тарелку на сектора;
набор из специальных стеклышек и палочек;
три пипетки;
непосредственно стандартные сыворотки, представленные 0(I), А(II) и В(III) гр. крови;
изотонический раствор хлорида натрия, йод и муравьиный спирт для обработки.

Для проведения исследования нужно подготовить несколько инструментов

Исследования для каждой группы проводится отдельной пипеткой для исключения возможных диагностических ошибок.

Как описано ранее, определение группы крови и резус-фактора стандартными сыворотками основывается на реакциях, происходящих с эритроцитами в период проведения исследования. Поэтому очень важно следить за состоянием оборудования и инструментов для теста, категорически избегая попадания на них влаги, которая разрушает структуру кровяных клеток.

Процесс исследования:

На тарелку, предварительно разделенную на три участка (сектора) карандашом, размещают при помощи пипетки три образца сыворотки разных видов. И помечают рядом с каждой каплей наименование раствора, соответствующего типу крови.
После того как капля сыворотки размещена на помеченном для неё секторе, пипетку необходимо тут же вернуть в ту же ёмкость, в которой она была ранее.
Далее идёт обработка пальца перед взятием крови, которая заключается в простом дезинфицировании участка кожи медицинским спиртом. Затем выполняют забор крови посредством укола в мякоть пальца.
Полученная алая жидкость собирается предметным стеклом или палочкой в количестве трёх капель, которые не должны превышать по размеру величину головки простой швейной булавки. Отобранные капли аккуратно перемещаются на тарелку с остатками сывороток. После данной манипуляции начинают подсчет времени при помощи часов.
Кровь аккуратно перемешивается с сывороточным раствором в строгих пределах каждого сектора при помощи специальных для каждого отдела стеклянных палочек. Палочки после единичного действия должны сменяться на новые. Проводить повторяющуюся манипуляцию надо до тех пор, пока образующиеся консистенции не приобретут однородный розовый оттенок.
По истечению пяти минут (время контролируется по часам), когда растворы находятся в состоянии протекании реакции, к ним добавляется изотонический хлорид натрия в количестве одной капли на каждый из секторов. Затем тарелку слегка раскачивают, чтобы образцы крови перемешались с добавленным в него составом, но не слишком сильно, чтобы образцы не смешались между собой.

Подробнее о том, как происходит определение типа крови, рассказывается в представленном ниже ролике:

Результаты исследования

При положительном результате в течение нескольких первых минут, ещё до добавления изотонического раствора, происходит склеивание эритроцитов, которое проявляется в возникновении красных сгустков в реагирующем растворе. В дальнейшем эти зернышки могут, сливаясь друг с другом, образовывать красные «островки». Если же говорить научным языком, это гемагглютинация – процесс склеивания между собой с дальнейшим выпадением в осадок эритроцитов крови.

Если же после проведённых манипуляций розовый цвет раствора остался неизменным, то реакция, что логично, является отрицательной.

Существует ряд закономерностей, которые зависят от комбинаций положительных и отрицательных реакций в сыворотках:

В случае если положительной реакции нет ни в одном из исследуемых секторов, то это означает, что реципиент имеет кровь группы 0(I).
Если неизменной осталось состояние сыворотки А(I), а две остальные дали положительную реакцию, это значит, что кровь исследуемого имеет А(II) группу.
В случае отрицательной реакции только на В(III) из всех трёх говорят, что реципиент имеет ту группу крови, на которую не «пошла», то есть В(III).
Если же красные зернышки образовались в каждой из трёх жидкостей, то такая кровь относится к AB(IV) группе.

Для удобства запоминания используется либо схема, либо таблица. Возникновение иных комбинаций относят к ошибочным, получившимся из-за погрешностей при проведении исследования.

Результаты исследования

Существует ряд таких погрешностей:

Неверная концентрация крови, используемой для измерения. Обычно к ложным результатам приводит превышение заданной нормы для добавления к сыворотке.
Несвежесть взятых образцов сыворотки или их неправильное хранение приводит к малоактивным реакциям с эритроцитами.
Низкие температуры могут привести к панагглютинации, которая, как правило, тоже проходит очень слабо.
Неточность временных рамок может привести к подсыханию поверхности сыворотки. То есть результат исследования становится почти не заметен.

Метод проведения исследования на предмет группы крови с использованием стандартных сывороток – самый распространённый среди мгновенных исследований в условиях экстренной необходимости. Это делает его наиболее значимым и уникальным в условиях современной медицины.

Определение группы крови по стандартным сывороткам используется часто (по сравнению с другими методиками). В основе данной техники — содержащиеся в крови агглютинины и агглютиногены в различных комбинациях.

Соединение одноименных агглютиногена и агглютинина сопровождается реакцией агглютинации (однородное пятно распадается на многочисленные мелкие пятна, состоящие из эритроцитов, склеившихся между собой).

Суть метода

При оказании медицинской помощи не всегда удается быстро остановить кровотечение, для переливания требуется определение группы крови, резус-фактора.

Существуют 2 эритроцитных антигена (агглютиногены А и В) и 2 антитела (а и b). Различные комбинации антигенов и антител образуют 4 группы крови.

Данный способ имеет преимущества, т. к. позволяет свести к одному многочисленные измерения.

Методика определения показателей

Определение групп крови по стандартным сывороткам проводится с использованием реактивов, содержащих агглютинины разных групп, вступающих в реакцию с агглютиногенами, находящимися на поверхности эритроцитов.

Чтобы выявить группу крови, достаточно воспользоваться стандартными сыворотками лишь II и III групп. Однако для исключения возможных ошибок с целью дополнительного контроля используют и остальные (I и IV групп).

Изготовление сыворотки

Стандартные сыворотки для определения группы крови получают из донорской крови. С этой целью используют специальную систему: выделяют плазму вместе с находящимися в ней антителами, затем ее разводят изотоническим раствором хлорида натрия.

Помещают 1 мл раствора NaCl 0,9% в пробирку, добавляют плазму (1 мл), взбалтывают состав. Берут 1 мл полученной смеси, переносят в другую пробирку с изотоническим раствором.

Манипуляцию повторяют, пока не получат разведение смеси в пропорции 1:256. Другие разведения не используют, чтобы исключить возникновение ошибки.

Для одного исследования группы крови с помощью стандартных сывороток их требуется 3 (2 серий для каждой группы), отличающихся по цвету:

I (0) — прозрачная жидкость, флакон снабжен белой этикеткой;
II (А) — жидкость голубая, флакон с 2 полосами синего цвета;
III (В) — бледно-розовая жидкость, флакон с 3 розовыми полосками;
IV(АВ) — желтая жидкость, на этикетке флакона 4 желтые полоски.

На этикетках указаны:

титр;
срок годности;
дата выпуска;
серийный номер.
данные об изготовителе.

Проведение исследования

Температура в помещении должна быть в пределах +15…+ 25°С, требуется хорошее освещение.

Используют специальный планшет, имеющий области с пометками. На него наносят каждую сыворотку (берут 2 образца, 1 из них — контрольный, 2 — для диагностики).

Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают каплю крови, смешивая с каждым в отдельности реагирующим раствором. Спустя несколько минут (5-6) анализируют полученные данные:

если происходит реакция агглютинации — сывороточный тест считается положительным;
при отсутствии агглютинации тест отрицательный.

Результаты исследования

В случае положительного результата эритроциты склеиваются (в реагирующем растворе образуются красные сгустки).

Если цвет раствора не изменился, реакция считается отрицательной. Есть закономерности, зависящие от комбинаций отрицательных и положительных реакций, происходящих в растворах:

I(0), если ни в одном образце нет положительной реакции;
II (А), если в образце II (А) состояние не изменилось, а в 2 остальных оказалась положительная реакция;
III(В), если только в образце III(В) реакция оказалась отрицательной;
IV(АВ), если в каждом из 3 образцов реакция оказалась положительной.

Появление других комбинаций связано с погрешностями, возникающими при исследовании.

Использование старых реактивов или неправильное проведение анализа может сопровождаться слабой реакцией. В таких случаях с целью уточнения необходимо сделать тесты с использованием других методик.

Вконтакте